TRIP CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423499

概要

Traipは、PCNAに結合し、DNA複製と連動したゲノム維持に機能するE3ユビキチンリガーゼであるTRIPをコードしている。TRIPは複製フォークの安定性に寄与し、DNA損傷に対するユビキチン依存的応答を協調的に制御することで、複製ストレスの解消と染色体完全性の維持を支える。マウス細胞では、TRAIPの活性はDNA修復およびユビキチンシグナル伝達と交差する経路を介して、細胞周期進行と有糸分裂の忠実性の制御に関連している。TRAIPが制御する過程の攪乱は、発生異常やがん生物学モデルに関連するゲノム不安定性表現型の研究において重要である。

TRIP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるTraip遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Traip内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Traipのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TRIPタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TRIPシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Traip欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TRIPの機能に不可欠なTraipエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Traipゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TRIP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびTRIP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Traip遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TRIP HDRプラスミド（m）および TRIP HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTraipホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTraip標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。