TP53INP2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405261-ACT

TP53INP2 (proteína nuclear 2 induzível pelo p53, tumor protein p53 inducible nuclear protein 2) é uma proteína responsiva ao estresse implicada na regulação da autofagia e no tráfego intracelular, com funções descritas na organização da biogênese de autofagossomos e no suporte a programas de autofagia seletiva. Tem sido associada ao transporte (shuttling) do citoplasma para o núcleo e a interações com a maquinaria de autofagia, conectando respostas ao estresse associadas ao p53 à remodelação catabólica. Por meio dessas funções, a TP53INP2 pode influenciar a homeostase celular sob privação de nutrientes e outros estressores, impactando vias que governam sobrevivência, metabolismo e controle de qualidade. A desregulação da autofagia e da sinalização de estresse envolvendo a TP53INP2 é relevante para estudos mecanísticos em biologia do câncer, neurodegeneração e fenótipos inflamatórios, nos quais a proteostase e a adaptação metabólica são perturbadas.

TP53INP2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TP53INP2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TP53INP2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TP53INP2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TP53INP2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TP53INP2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TP53INP2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TP53INP2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TP53INP2 em células tumorais com expressão de TP53INP2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.