TorsinA Plasmide Double Nickase (h): sc-404651-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- TorsinA Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il TorsinA Double Nickase Plasmid (h) e il TorsinA Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira TOR1A. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: TorsinA Antibody (D-7): sc-373915
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
TorsinA Plasmide Double Nickase (h) | sc-404651-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TorsinA Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404651-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TOR1A codifica per TorsinA, un’ATPasi AAA+ localizzata nel reticolo endoplasmatico e nello spazio perinucleare, dove contribuisce all’integrità dell’involucro nucleare e all’omeostasi delle endomembrane. TorsinA partecipa a processi quali la biogenesi del complesso del poro nucleare, il rimodellamento di membrana e la regolazione delle vie di controllo qualità delle proteine collegate allo stress del RE. L’alterazione delle funzioni associate a TOR1A può perturbare l’accoppiamento nucleo-citoscheletrico e il traffico intracellulare, rendendolo un nodo chiave per lo studio della proteostasi e dei fenotipi cellulari legati all’involucro nucleare. Varianti di TOR1A sono fortemente associate alla distonia a esordio precoce e alla relativa neurobiologia, offrendo un punto di accesso molecolare per studi meccanicistici in modelli neuronali e non neuronali.
TorsinA Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TOR1A nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TOR1A. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TOR1A. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TOR1A interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.