TorsinA CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-424414

概要

Tor1aは、AAA+ ATPaseであるtorsinAをコードしており、torsinAは小胞体および核膜に局在します。そこでLAP1およびLULL1との相互作用を介して、核膜の完全性、プロテオスタシス、ならびに膜関連リモデリングに寄与します。マウス細胞では、torsinAの活性は核-細胞質間輸送の調節、小胞体ストレス応答、ミスフォールドタンパク質の品質管理と関連しています。TOR1A機能の破綻は神経機能障害やジストニア関連表現型と結び付いており、運動回路の生物学や細胞ストレス適応の研究において重要です。Tor1aはまた、核膜の攪乱が細胞骨格とのカップリングや細胞内輸送に与える影響を調べるためのモデル遺伝子座としても用いられています。

TorsinA CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるTor1a遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Tor1a内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Tor1aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TorsinAタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TorsinAシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Tor1a欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TorsinAの機能に不可欠なTor1aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Tor1aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TorsinA CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびTorsinA CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Tor1a遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TorsinA HDRプラスミド（m）および TorsinA HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTor1aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTor1a標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。