Topo IIIα CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404439

概要

TOP3AはヒトDNAトポイソメラーゼIIIαをコードしており、DNA複製・組換え・修復の過程で生じる一本鎖DNAのトポロジー中間体を解消するI型Aトポイソメラーゼです。Topo IIIαはBLM、RMI1、RMI2とともにBTRR複合体として機能し、二重ホリデイジャンクションを解消して異常な交叉（クロスオーバー）イベントを抑制し、相同組換えにおけるゲノム安定性を維持します。また、オルガネラ特異的な複製・修復因子との協調を通じてミトコンドリアDNAの維持も支え、TOP3Aを核およびミトコンドリアのゲノム完全性に結び付けています。TOP3A関連経路の破綻はゲノム不安定性の表現型と関連し、DNA修復不全や複製ストレス感受性を特徴とする遺伝性疾患とも結び付けられています。

Topo IIIα CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTOP3A遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TOP3A内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、TOP3Aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Topo IIIαタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Topo IIIαシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TOP3A欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Topo IIIαの機能に不可欠なTOP3Aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、TOP3Aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Topo IIIα CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびTopo IIIα CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TOP3A遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Topo IIIα HDRプラスミド（h）および Topo IIIα HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTOP3Aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTOP3A標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。