Tomosyn Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403625-ACT

O STXBP5 humano codifica a tomosina, uma proteína ligante de sintaxina que regula a montagem do complexo SNARE e o preparo (priming) de vesículas para modular a fusão de membranas e a exocitose. Ao interagir com t-SNAREs da membrana plasmática, a tomosina influencia a secreção regulada em contextos neuronais e endócrinos, moldando a dinâmica de liberação de neurotransmissores e hormônios. A modulação do tráfego vesicular mediada por STXBP5 tem sido estudada em vias que controlam a transmissão sináptica, a liberação de grânulos plaquetários e a secreção de insulina, conectando sua atividade a fenótipos cardiometabólicos e neurobiológicos. Alterações na expressão ou na função da tomosina podem perturbar redes de sinalização dependentes de secreção, tornando o STXBP5 um nó útil para investigar a fusão vesicular desregulada em modelos celulares relevantes para doenças.

Tomosyn O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de STXBP5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Tomosyn O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus STXBP5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição STXBP5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Tomosyn. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus STXBP5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Tomosyn no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Tomosyn em células tumorais com expressão de STXBP5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.