Tom1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423467

概要

Tom1（Myb1の標的）は、ユビキチン化されたカーゴをESCRT関連の輸送機構に連結するエンドソームアダプタータンパク質をコードしており、エンドソーム成熟とリソソームへのソーティングに寄与します。クラスリンおよびESCRT関連コンポーネントとの相互作用を通じて、TOM1は受容体のターンオーバー、膜タンパク質恒常性、ならびにエンドサイトーシス後のシグナル減衰の制御に関与します。これらの過程はオートファジー—リソソーム機能や自然免疫シグナルとも交差するため、Tom1は小胞輸送が炎症および細胞ストレス応答をどのように調節するかを研究する上で重要です。エンドソームでのソーティング異常やユビキチン依存的な輸送の破綻は、マウスモデルにおいて神経炎症性・神経変性様の表現型や免疫調節異常としばしば関連付けられています。

Tom1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるTom1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Tom1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Tom1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Tom1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Tom1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Tom1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Tom1の機能に不可欠なTom1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Tom1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Tom1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびTom1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Tom1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Tom1 HDRプラスミド（m）および Tom1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTom1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTom1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。