TNP1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423463

Panoramica

Tnp1 codifica la transition protein 1 (TNP1), una proteina nucleare basica espressa nelle fasi tardive della spermatogenesi che sostituisce gli istoni negli spermatidi in allungamento prima della deposizione delle protamine. TNP1 promuove la condensazione della cromatina e l’impacchettamento del genoma durante la spermiogenesi, favorendo una corretta modellazione del nucleo e la maturazione degli spermatozoi. L’alterazione di Tnp1 compromette la transizione da istoni a protamine e può portare, nei modelli murini, a una struttura anomala della cromatina spermatic a e a fenotipi di ridotta fertilità maschile. In quanto regolatore della cromatina ristretto alle cellule germinali, TNP1 è ampiamente studiato nei percorsi che governano la riprogrammazione epigenetica, la compattazione del DNA e la biologia riproduttiva.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TNP1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Tnp1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Tnp1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Tnp1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TNP1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Tnp1 per lo studio della segnalazione di TNP1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Tnp1 critici per la funzione di TNP1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Tnp1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TNP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal TNP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Tnp1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TNP1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR TNP1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Tnp1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Tnp1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.