TNP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423463

概要

Tnp1は、移行タンパク質1（TNP1）をコードする。TNP1は塩基性の核内タンパク質で、精子形成後期に発現し、プロタミンが蓄積する前段階において、伸長する精子細胞（elongating spermatids）でヒストンを置換する。TNP1は精子形成（spermiogenesis）におけるクロマチン凝縮とゲノムのパッケージングを促進し、適切な核形態の形成と精子成熟を支える。Tnp1の機能が破綻すると、ヒストンからプロタミンへの移行が乱れ、マウスモデルでは精子クロマチン構造の異常や雄性不妊の表現型の低下につながり得る。生殖細胞に限定して働くクロマチン制御因子として、TNP1はエピジェネティックな再プログラミング、DNA圧縮、生殖生物学を司る経路の研究で広く扱われている。

TNP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるTnp1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Tnp1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Tnp1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TNP1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TNP1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Tnp1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TNP1の機能に不可欠なTnp1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Tnp1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TNP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびTNP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Tnp1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TNP1 HDRプラスミド（m）および TNP1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTnp1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTnp1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。