Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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TNAP Double Nickaseプラスミド (h): sc-400784-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- TNAP Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- TNAPダブルニカースプラスミド（h）およびTNAPダブルニカースプラスミド（h2）は、ALPLを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: TNAP 抗体 (TRA-2-39): sc-21708
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
TNAP Double Nickaseプラスミド (h) | sc-400784-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TNAP Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-400784-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ALPLは、組織非特異的アルカリホスファターゼ（TNAP）をコードしている。TNAPはグリコシルホスファチジルイノシトール（GPI）アンカー型の細胞外酵素であり、細胞外のリン酸モノエステルを加水分解して、無機リン酸とピロリン酸のバランスを調節する。ピロリン酸を分解することで、TNAPは石灰化（ミネラル化）過程を調節し、骨および歯のマトリックスの適切な成熟を支える。さらに、細胞外環境におけるヌクレオチドの脱リン酸化を介して、プリン作動性シグナル伝達にも影響を及ぼす。ALPL/TNAP活性は、リン酸恒常性や細胞外マトリックスの石灰化を制御する経路と交差しており、その機能変化は低ホスファターゼ症や病的石灰化の表現型と関連する。表面に露出し、触媒活性を測定可能な酵素であるTNAPは、ミネラル代謝および細胞分化モデルにおける遺伝子型―表現型関係を研究するうえで扱いやすい標的となる。
TNAP ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ALPL 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ALPL内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ALPLの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ALPLが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。