TMEM205 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-408587-ACT

TMEM205 codifica uma proteína transmembranar prevista de múltiplas passagens, localizada em membranas celulares, onde se acredita que influencie o tráfego de membranas e processos relacionados ao transporte que moldam a homeostase dos compartimentos intracelulares. A expressão de TMEM205 tem sido associada a respostas celulares ao estresse alteradas e a fenótipos de transporte de fármacos, implicando-a em vias que modulam a exposição das células a xenobióticos. Na biologia do câncer, TMEM205 é frequentemente estudado por associações com a resposta à quimioterapia, particularmente em contextos em que a dinâmica de membranas e o manejo vesicular afetam o acúmulo de fármacos. Essas características fazem de TMEM205 um alvo útil para investigar como proteínas associadas à membrana ajustam a adaptação celular a estressores ambientais e farmacológicos.

TMEM205 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TMEM205 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TMEM205 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TMEM205 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TMEM205, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TMEM205. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TMEM205 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TMEM205 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TMEM205 em células tumorais com expressão de TMEM205 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.