TMEM132A CRISPR Activationプラスミド (h): sc-412402-ACT

TMEM132A（transmembrane protein 132A）は、細胞―細胞間コミュニケーションや、細胞表面における接着関連シグナルの制御に関与するとされるヒトの単回膜貫通型膜タンパク質です。TMEM132Aの発現は、神経およびグリアの生物学と関連づけられており、細胞骨格の編成や膜関連シグナル伝達など、細胞の形態や結合性を形作るプロセスに影響する経路に関与することが示唆されています。遺伝学的研究および発現解析により、TMEM132Aは神経精神疾患および神経発達に関わる表現型との関連が報告されており、神経機能や回路形成の機序を検討する上での重要性が支持されています。膜関連因子としてのTMEM132Aは、細胞外からの刺激がどのように細胞内応答へと変換され、分化やストレス応答性に影響を及ぼすのかを解析する際にも有用です。

TMEM132A CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TMEM132Aの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TMEM132A CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TMEM132A 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTMEM132A転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TMEM132Aの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTMEM132A遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTMEM132A依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTMEM132A発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTMEM132A経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。