TMEM119 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404363-ACT

TMEM119 codifica uma proteína transmembrana do tipo I, enriquecida em micróglia e noutros contextos da linhagem mieloide, onde é amplamente utilizada como marcador da identidade microglial e do estado de maturação. Embora os seus papéis mecanísticos ainda estejam a ser esclarecidos, a expressão de TMEM119 acompanha programas que moldam a vigilância imunitária, a homeostase celular e a sinalização inflamatória no sistema nervoso central. Estados microgliais TMEM119-positivos alterados têm sido associados a modelos de investigação de doenças neuroinflamatórias e neurodegenerativas, incluindo estudos sobre ativação microglial, remodelação tecidular e interações com neurónios e astrócitos. Por ser uma proteína associada à membrana, o TMEM119 também é relevante para investigar redes regulatórias ligadas à superfície celular e o controlo transcricional específico de linhagem.

TMEM119 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TMEM119 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TMEM119 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TMEM119 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TMEM119, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TMEM119. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TMEM119 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TMEM119 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TMEM119 em células tumorais com expressão de TMEM119 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.