TM6SF1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-412251-ACT

TM6SF1 (membro 1 da superfamília transmembrana 6) é uma proteína de membrana multipass prevista, com enriquecimento relatado em tecidos metabólicos e associações com o manuseio de lipídios e processos de tráfego associados à membrana. Embora seu mecanismo molecular ainda não esteja completamente definido, TM6SF1 tem sido associada a vias celulares que influenciam a homeostase lipídica, incluindo o metabolismo de lipoproteínas e a organização do sistema endomembranar relevante para a função dos hepatócitos. Variações ou desregulação na expressão de TM6SF1 foram relatadas em conjuntos de dados ligados a fenótipos metabólicos, sustentando a investigação de seu papel na biologia hepática e no equilíbrio energético sistêmico. Esses atributos tornam TM6SF1 um alvo útil para explorar o controle transcricional de programas relacionados a lipídios e a função de proteínas de membrana em modelos celulares humanos.

TM6SF1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TM6SF1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TM6SF1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TM6SF1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TM6SF1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TM6SF1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TM6SF1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TM6SF1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TM6SF1 em células tumorais com expressão de TM6SF1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.