TLR4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (bovine): sc-437333

概要

Toll様受容体4（TLR4）は、リポ多糖（LPS）をはじめとする病原体関連および損傷関連のリガンドを認識し、ウシの骨髄系細胞および上皮細胞における自然免疫シグナル伝達を開始するパターン認識受容体である。リガンドの結合によりMyD88依存性およびTRIF依存性の経路が駆動され、NF-κBおよびIRFの転写プログラムが活性化されて、炎症性サイトカイン、ケモカイン、ならびにI型インターフェロン応答が制御される。TLR4シグナルはMAPKカスケードやインフラマソームのプライミングとも交差し、白血球の動員や組織レベルの炎症トーンを形成する。TLR4活性の制御不全は、乳房炎やエンドトキシン誘発性の全身反応を含むウシの炎症性・感染性疾患の表現型と関連づけられており、宿主—病原体相互作用や免疫恒常性を研究するうえで重要である。

TLR4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（bovine）は、bovine細胞株における遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TLR4タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TLR4シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TLR4の機能に不可欠なエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TLR4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（bovine）およびTLR4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（bovine2）によってコードされるgRNAは、遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TLR4 HDRプラスミド（bovine）および TLR4 HDRプラスミド（bovine2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定の標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。