Tim13A/B CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-408855

概要

TIMM13はミトコンドリア膜間腔に存在するsmall Tim13A/Bシャペロンをコードしており、TIMM8A/TIMM8Bと協調して、TOM複合体から内膜挿入装置へ疎水性前駆体タンパク質を護送します。この経路は、内膜キャリアやその他の多回膜貫通タンパク質の適切な生合成を促進することで酸化的リン酸化を支え、TIMM13の機能をミトコンドリアタンパク質輸入、膜電位の維持、プロテオスタシスと結び付けています。small Timシャペロンネットワークの破綻は、ミトコンドリア機能不全、細胞ストレス応答の亢進、エネルギー代謝の障害に寄与し得ます。これらは神経変性やがん代謝の研究でしばしば検討される過程です。したがってTIMM13は、ミトコンドリアの品質管理、呼吸鎖恒常性、ストレス適応シグナル伝達に関する研究において重要な分子です。

Tim13A/B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTIMM13遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TIMM13内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、TIMM13のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Tim13A/Bタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Tim13A/Bシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TIMM13欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Tim13A/Bの機能に不可欠なTIMM13エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、TIMM13ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Tim13A/B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびTim13A/B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TIMM13遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Tim13A/B HDRプラスミド（h）および Tim13A/B HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTIMM13ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTIMM13標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。