Tim13A/B Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-408855

Panoramica

TIMM13 codifica la piccola chaperone Tim13A/B dello spazio intermembrana mitocondriale, che coopera con TIMM8A/TIMM8B per accompagnare le proteine precursori idrofobiche dal complesso TOM ai macchinari di inserzione nella membrana interna. Questa via sostiene la fosforilazione ossidativa promuovendo la corretta biogenesi dei trasportatori della membrana interna e di altre proteine multipasso, collegando la funzione di TIMM13 all’importazione proteica mitocondriale, al mantenimento del potenziale di membrana e alla proteostasi. L’alterazione delle reti di chaperoni small Tim può contribuire a disfunzione mitocondriale, aumento delle risposte cellulari allo stress e compromissione del metabolismo energetico, processi spesso indagati negli studi sulla neurodegenerazione e sul metabolismo del cancro. TIMM13 è quindi rilevante per la ricerca sul controllo di qualità mitocondriale, l’omeostasi della catena respiratoria e la segnalazione adattativa allo stress.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Tim13A/B (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TIMM13 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TIMM13 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TIMM13 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Tim13A/B.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TIMM13 per lo studio della segnalazione di Tim13A/B, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TIMM13 critici per la funzione di Tim13A/B
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TIMM13 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Tim13A/B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Tim13A/B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TIMM13. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Tim13A/B Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Tim13A/B (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TIMM13 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TIMM13 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.