Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
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TIM Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423480
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- TIM O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico TIM, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:TIM Anticorpo (H-11): sc-166785
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
TIM Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-423480 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
O gene Tpi1 de camundongo codifica a isomerase de triosefosfato (TIM), uma enzima central da glicólise que catalisa a interconversão reversível entre fosfato de di-hidroxiacetona e gliceraldeído-3-fosfato. Ao manter um fluxo eficiente pela glicólise, a TIM sustenta a produção celular de ATP, o equilíbrio redox e o acoplamento metabólico a vias como a via das pentoses fosfato e entradas anapleróticas no ciclo do TCA (ciclo do ácido tricarboxílico). Assim, a atividade de Tpi1 é parte integrante da homeostase bioenergética em tecidos proliferativos e diferenciados, e sua desregulação é relevante para estudos de respostas ao estresse metabólico, adaptação à hipóxia e fenótipos dependentes da glicólise. Alterações no controle glicolítico envolvendo Tpi1 também são comumente investigadas em modelos de disfunção neurológica, patologia hemolítica e reprogramação metabólica associada ao câncer.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO TIM (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Tpi1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Tpi1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Tpi1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína TIM.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Tpi1 para a investigação da sinalização de TIM, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Tpi1 críticos para a função TIM
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Tpi1 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo TIM Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo TIM Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Tpi1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo TIM Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR TIM (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Tpi1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Tpi1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.