Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
TIEG1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402480
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- TIEG1 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico TIEG1, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: TIEG1 Antibody (95-D): sc-130408
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
TIEG1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-402480 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
KLF10 codifica TIEG1 (TGF-β inducible early growth response protein 1), un fattore di trascrizione con dita di zinco di tipo Krüppel-like che integra la segnalazione del transforming growth factor-β (TGF-β)/SMAD con un controllo dipendente dal contesto della progressione del ciclo cellulare, della differenziazione e dell’apoptosi. TIEG1 regola programmi trascrizionali coinvolti nel rimodellamento della matrice extracellulare e nell’impegno di linea, e può modulare il cross-talk con le vie di segnalazione MAPK e ormonali in contesti epiteliali, ossei e immunitari. Un’attività alterata di KLF10/TIEG1 è stata associata a risposte fibrotiche dis-regolate, a una funzione osteoblastica e a un rimodellamento osseo anomali, nonché a cambiamenti nelle reti trascrizionali oncosoppressive, rendendolo rilevante per studi meccanicistici sul controllo della proliferazione e sull’omeostasi tissutale. Il suo ruolo di fattore di risposta precoce lo rende un nodo utile per analizzare la regolazione genica dipendente dallo stimolo e l’organizzazione a valle delle vie di segnalazione.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TIEG1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene KLF10 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del KLF10 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto KLF10 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TIEG1.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di KLF10 per lo studio della segnalazione di TIEG1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni KLF10 critici per la funzione di TIEG1
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di KLF10 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal TIEG1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal TIEG1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus KLF10. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal TIEG1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR TIEG1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia KLF10 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio KLF10 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.