Plásmido CRISPR de Activación (h) TICAM-1: sc-414627-ACT

TICAM1 codifica TICAM-1 (también conocido como TRIF), un adaptador esencial en la señalización inmunitaria innata aguas abajo de TLR3 y TLR4 que conecta la activación de receptores de reconocimiento de patrones con programas transcripcionales dependientes de IRF3/IRF7 y de NF-κB. Mediante el reclutamiento de TBK1 e IKKε y su integración con nodos de señalización de TRAF/RIPK1, TICAM-1 coordina la producción de interferón de tipo I, la inducción de citocinas inflamatorias y vías de muerte celular programada. La señalización desregulada de TICAM1 se ha asociado con respuestas antivirales alteradas e inflamación aberrante, y se estudia con frecuencia en el contexto de la biología de enfermedades infecciosas y mediadas por el sistema inmunitario. Por ello, TICAM1 se utiliza ampliamente como herramienta mecanística para explorar las vías de inmunidad innata dependientes de TLR y su interacción con redes de estrés celular y citocinas.

TICAM-1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TICAM1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TICAM-1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TICAM1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TICAM1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TICAM-1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TICAM1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TICAM-1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TICAM-1 en células tumorales con expresión de TICAM1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.