THUMPD3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420731

概要

Thumpd3 は、RNA 代謝および転写後制御を支える RNA 結合機能に関与するとされる、THUMP ドメイン含有タンパク質 THUMPD3 をコードしています。THUMP ドメインは tRNA／rRNA 修飾酵素にしばしば関連しており、リボソーム生合成、翻訳の忠実性、ならびに細胞ストレス応答に影響するプロセスと結び付いています。マウス系では、RNA プロセシングや翻訳制御の撹乱が増殖・分化プログラムに影響し得るため、THUMPD3 は遺伝子発現恒常性の研究において重要な対象となります。RNA 修飾およびプロセシング経路の変調は、神経発生、代謝制御、がん生物学における表現型と広く関連しており、THUMPD3 依存的ネットワークを検討するための機序的背景を提供します。

THUMPD3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるThumpd3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Thumpd3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Thumpd3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、THUMPD3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、THUMPD3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Thumpd3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• THUMPD3の機能に不可欠なThumpd3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Thumpd3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• THUMPD3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびTHUMPD3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Thumpd3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  THUMPD3 HDRプラスミド（m）および THUMPD3 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはThumpd3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のThumpd3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。