THOC1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403390-ACT

THOC1 codifica uma subunidade central do complexo THO/TREX, que acopla a transcrição pela RNA polimerase II ao processamento do pré-mRNA e à exportação de mRNA através do poro nuclear. Ao coordenar a montagem de ribonucleoproteínas mensageiras (mRNPs), THOC1 sustenta a integridade do transcriptoma, limita o acúmulo de R-loops e contribui para a estabilidade do genoma durante a replicação e as respostas a danos no DNA. A perturbação de componentes do THO/TREX tem sido associada à instabilidade genômica ligada à transcrição e a programas de expressão alterados, frequentemente estudados em biologia do câncer e em outros contextos proliferativos ou responsivos a estresse. Assim, a THOC1 humana é amplamente utilizada como um ponto de entrada mecanístico para investigar o acoplamento transcrição–exportação, a vigilância de RNA e o processamento de RNA associado à cromatina.

THOC1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de THOC1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

THOC1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus THOC1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição THOC1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de THOC1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus THOC1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de THOC1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via THOC1 em células tumorais com expressão de THOC1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.