TGF beta 1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400067-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- TGF beta 1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il TGF beta 1 Double Nickase Plasmid (h) e il TGF beta 1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira TGFB1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: TGF beta 1 Antibody (3C11): sc-130348
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
TGF beta 1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400067-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TGF beta 1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400067-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TGFB1 codifica il transforming growth factor beta 1 (TGF beta 1), una citochina secreta che segnala attraverso TGFBR1/2 per attivare la trascrizione dipendente da SMAD2/3 e interagire con le vie MAPK, PI3K/AKT e delle Rho GTPasi. È un regolatore centrale del rimodellamento della matrice extracellulare, della transizione epitelio–mesenchimale, dell’immunosoppressione e dei programmi di guarigione delle ferite, influenzando in modo dipendente dal contesto l’arresto del ciclo cellulare e la differenziazione. Una segnalazione di TGF beta 1 deregolata è implicata in patologie fibrotiche, nel rimodellamento del microambiente tumorale e in infiammazione aberrante, rendendo TGFB1 un nodo comune per studiare il crosstalk tra compartimenti stromali e immunitari.
TGF beta 1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TGFB1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TGFB1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TGFB1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TGFB1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.