TGase1 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-423374-ACT

マウスTgm1はトランスグルタミナーゼ1（TGase1）をコードしており、これはCa²⁺依存性の酵素として、終末期角化細胞分化の過程で角化被膜（cornified envelope）を安定化するために、構造タンパク質間のε-(γ-グルタミル)リジン架橋を触媒します。TGase1活性は表皮バリアの形成と恒常性維持に不可欠であり、角化プログラムや細胞表面での細胞外マトリックス再構築と協調して働きます。TGase1の機能障害や発現制御の破綻は皮膚バリアの完全性を損ない、落屑の異常、炎症を起こしやすい表現型、環境ストレスへの応答不全などを引き起こします。このためTgm1は、上皮分化、バリア生物学、皮膚疾患の機序を規定する経路において広く研究されています。

TGase1 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Tgm1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TGase1 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Tgm1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTgm1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TGase1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTgm1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTGase1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTgm1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTGase1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。