TFIIIB′′ CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-436781

概要

Bdp1はマウスのTFIIIB″サブユニットをコードしており、RNAポリメラーゼIII（Pol III）転写装置の中核をなす構成要素である。Bdp1はTBPおよびBRFタンパク質と協調してPol IIIプロモーター上にTFIIIBを形成する。TFIIIB″はtRNA、5S rRNA、その他の小型ノンコーディングRNAのPol III依存的転写の開始および再開始を支え、Bdp1の機能を翻訳能、プロテオスタシス、細胞増殖制御と結び付けている。Pol IIIの産生量は栄養感知やストレス応答と密接に連動しているため、Bdp1の攪乱は細胞周期の進行や代謝適応に影響し得る。Pol III転写の異常制御やTFIIIB機能の変化は、増殖性疾患やゲノム安定性経路の文脈でしばしば研究されており、Bdp1は哺乳類細胞における機構解析の有用な標的となる。

TFIIIB″ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるBdp1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Bdp1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Bdp1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TFIIIB″タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TFIIIB″シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Bdp1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TFIIIB″の機能に不可欠なBdp1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Bdp1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TFIIIB″ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびTFIIIB″ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Bdp1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TFIIIB″ HDRプラスミド（m）および TFIIIB″ HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはBdp1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のBdp1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。