TFEB Plasmídeo duplo de Nickase (m): sc-437332-NIC
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- TFEBO plasmídeo de dupla Nickase (m) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase TFEB (m) e o Plasmídeo Double Nickase TFEB (m2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para Tfeb. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
TFEB Plasmídeo duplo de Nickase (m) | sc-437332-NIC | 20 µg | $410.00 |
O gene **Tfeb** de camundongo codifica a **TFEB**, um fator de transcrição do tipo hélice–alça–hélice básica com zíper de leucina, que atua como regulador mestre da biogênese lisossomal e da autofagia ao coordenar a rede gênica **CLEAR**. A atividade de TFEB é rigidamente controlada por vias que detectam nutrientes e estresse, incluindo a fosforilação dependente de **mTORC1**, que influencia o sequestro citoplasmático versus a translocação nuclear, modulando assim a função dos lisossomos, o fluxo autofágico e a depuração celular. Por meio desses programas, TFEB molda a proteostase, o controle de qualidade mitocondrial e a sinalização imune inata, conectando pistas ambientais ao remodelamento catabólico. A sinalização desregulada de TFEB tem sido associada a fenótipos de armazenamento lisossomal, estresse proteotóxico relacionado à neurodegeneração, desequilíbrio metabólico e adaptação de células tumorais ao estresse, tornando **Tfeb** um alvo-chave para estudos mecanísticos da homeostase celular.
TFEB O Plasmídeo de Nickase Dupla (m) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Tfeb em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Tfeb. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Tfeb. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Tfeb interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.