TFE3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-437344-ACT

O gene **Tfe3** de camundongo codifica o fator de transcrição **TFE3**, um membro da família **MiT/TFE** que se liga a motivos **E-box** para coordenar programas que controlam a biogênese lisossomal, a autofagia, o metabolismo celular e a adaptação ao estresse. O TFE3 integra sinais de detecção de nutrientes, incluindo a regulação dependente de **mTORC1**, para modular respostas transcricionais ligadas ao tráfego endolisossomal e à homeostase mitocondrial. A atividade desregulada de TFE3 tem sido associada a alterações no fluxo catabólico, sinalização imune e inflamatória aberrante e reprogramação transcricional oncogênica em modelos de tumorigênese. Na pesquisa biomédica, **Tfe3** é comumente estudado por seu papel em redes gênicas lisossomais conduzidas por **TFEB/TFE3**, no remodelamento metabólico e em efeitos dependentes do contexto sobre proliferação e diferenciação.

TFE3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Tfe3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TFE3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Tfe3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Tfe3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TFE3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Tfe3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TFE3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TFE3 em células tumorais com expressão de Tfe3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.