TET1 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h2): sc-400845-LAC-2

O TET1 humano (ten-eleven translocation 1) codifica uma dioxigenase dependente de Fe(II)/2-oxoglutarato que catalisa a oxidação iterativa da 5-metilcitosina em 5-hidroximetilcitosina e em derivados ainda mais oxidados, promovendo a desmetilação ativa do DNA e a remodelação epigenética. A atividade de TET1 molda programas transcricionais por meio da regulação da metilação em ilhas CpG, da dinâmica de enhancers e do estado da cromatina, conectando-se a processos de reparo do DNA e à manutenção da integridade do genoma associada à replicação. A desregulação da expressão ou da função de TET1 está ligada a paisagens aberrantes de metilação do DNA observadas no câncer e em contextos do neurodesenvolvimento e de doenças neurodegenerativas, tornando-o um nó central em estudos sobre a estabilidade do epigenoma. A edição gênica de TET1 permite a dissecação mecanística da renovação da metilação do DNA, da especificação de linhagem e de redes de pluripotência, bem como o mapeamento funcional de elementos regulatórios sensíveis à metilação em modelos celulares humanos.

As Partículas de Ativação Lentivirais TET1 (h2) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de TET1 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais TET1 (h2) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição TET1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de TET1. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo TET1 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.