TESK2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-432964

Panoramica

La chinasi associata ai testicoli 2 (Testis-associated kinase 2, TESK2), codificata nel topo dal gene *Tesk2*, è una chinasi serina/treonina che regola la dinamica del citoscheletro di actina fosforilando e inibendo la cofilina, influenzando così il turnover dei filamenti, la forma cellulare e la motilità. L’attività di TESK2 collega segnali a monte, incluse le vie delle GTPasi della famiglia Rho, ai processi di rimodellamento del citoscheletro che incidono su adesione, migrazione e traffico vescicolare. L’espressione è arricchita nei tessuti testicolari e nelle cellule germinali, a supporto di ruoli nella spermatogenesi e nella riorganizzazione del citoscheletro durante la maturazione delle cellule germinali. Una segnalazione di TESK2 deregolata e il rimodellamento dell’actina dipendente dalla cofilina sono comunemente studiati in modelli di migrazione cellulare alterata e di architettura tissutale, risultando rilevanti per studi meccanicistici di disturbi dello sviluppo e proliferativi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TESK2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Tesk2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Tesk2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Tesk2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TESK2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Tesk2 per lo studio della segnalazione di TESK2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Tesk2 critici per la funzione di TESK2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Tesk2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TESK2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal TESK2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Tesk2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TESK2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR TESK2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Tesk2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Tesk2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.