TERT Double Nickaseプラスミド (h): sc-400316-NIC

ヒトTERTは、テロメラーゼの触媒活性を担う逆転写酵素サブユニットをコードしており、テロメアDNAリピートを伸長して、DNA複製に伴うテロメアの進行性短縮に拮抗します。TERTは、テロメア長の制御とテロメアキャッピングの調節を通じて、染色体の安定性、複製能力、DNA損傷チェックポイントシグナル伝達を支え、ATM/ATR介在性応答や細胞老化プログラムなどの経路と交差します。TERT活性の変化は、テロメア生物学関連疾患、ゲノム不安定性、腫瘍形成過程と関連しており、細胞の不死化、ストレス誘導性老化、クローン進化を研究するうえでの中核的な結節点となっています。さらにTERTは、増殖やストレス耐性に影響し得る、転写制御やミトコンドリア恒常性維持における非典型的（ノンカノニカル）な役割についても研究されています。

TERT ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における TERT 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、TERT内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、TERTの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、TERTが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。