TERT CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400316-ACT

ヒトTERTは、テロメラーゼの触媒サブユニットであるテロメラーゼ逆転写酵素をコードしており、テロメア反復配列を伸長することで染色体末端の完全性を維持し、長期的な複製能を可能にする。TERTの活性は、シェルテリン複合体による制御、DNA複製ストレス応答、そしてテロメアが機能不全に陥った際に作動するATM/ATRなどのDNA損傷シグナル伝達経路を含む、テロメア維持ネットワークと協調している。テロメラーゼ発現の制御異常は、細胞老化の変化、ゲノム不安定性、不死化といった表現型に寄与し、またテロメア生物学の遺伝性または後天的な撹乱は、早期のテロメア短縮を特徴とする多様な疾患と関連している。テロメア恒常性の中心的ハブとして、TERTは幹細胞の自己複製、複製老化、ならびにテロメア駆動型のゲノム維持に関するモデルで広く研究されている。

TERT CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TERTの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TERT CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TERT 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTERT転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TERTの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTERT遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTERT依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTERT発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTERT経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。