TdT CRISPR/Cas9 케이오 플라스미드 (h): sc-406822

개요

DNTT는 림프구 발달 과정에서 V(D)J 재조합 중간체에 주형 없이(nontemplated) 뉴클레오타이드를 첨가하는 특수한 DNA 중합효소인 말단 데옥시뉴클레오티딜 전이효소(TdT)를 암호화한다. TdT는 면역글로불린 및 T 세포 수용체 유전자 좌위에서 접합부 다양성(junctional diversity)을 증가시켜 항원 수용체 레퍼토리를 형성하고 적응면역의 특이성에 기여한다. TdT 활성은 재조합 신호 서열에서 일어나는 DNA 이중가닥 절단(DSB) 복구 과정과 말단 연결(end-joining) 사건과 긴밀하게 연관되어 있다. 비정상적인 DNTT 발현은 미성숙 림프계 상태의 표지자로 널리 사용되며, 백혈병 발생, 유전체 불안정성, 계통(lineage) 결정의 맥락에서 자주 연구된다.

TdT CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (h)는 human 세포주에서 DNTT 유전자의 표적 파괴를 위해 설계된 플라스미드 풀입니다. 각 플라스미드는 DNTT 유전자 내의 서로 다른 부위를 표적으로 하는 고유한 단일 가이드 RNA(sgRNA)와 Streptococcus pyogenes Cas9 뉴클레아제를 함께 발현합니다. 또한 이 플라스미드들은 GFP를 암호화하여, 형광 현미경이나 유세포 분석기를 통해 성공적으로 형질전환된 세포를 형광으로 식별하고 농축할 수 있게 합니다.

다중 가이드 설계는 Cas9에 의한 이중 가닥 절단 형성 후 DNTT의 개방 독서 틀(ORF)을 파괴하는 삽입 또는 결실(indel)이 발생할 가능성을 높입니다. CRISPR/Cas9 시스템에 의해 유발된 DNA 절단은 내인성 비동종 말단 결합(NHEJ) 경로를 통해 복구되며, 이는 종종 TdT 단백질 발현을 소멸시키는 프레임 시프트 돌연변이를 초래합니다.

이 CRISPR 녹아웃 시스템은 TdT 신호 전달 연구, 기능 유전체학 연구, 암 생물학 연구 및 인간 세포주에서의 치료 반응 평가를 위한 DNTT 결핍 세포 모델을 효율적으로 생성할 수 있게 합니다.

주요 특징

• TdT 기능에 중요한 DNTT 엑손을 표적하는 sgRNA
  전달을 단순화하기 위해 단일 플라스미드에서 SpCas9 및 sgRNA의 공동 발현
  형질전환된 세포 식별을 위한 GFP 리포터
  녹아웃 효율 향상을 위해 여러 DNTT 게놈 부위를 표적하는 플라스미드 풀
  형질전환을 통한 전달과 호환

설계 변형

CRISPRs +/- HDR

• TdT CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (h) 및 TdT CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (h2)에 의해 암호화되는 gRNA는 DNTT 유전자좌 내의 서로 다른 부위를 표적화합니다. 표적화 설계 중 하나 또는 둘 다 이용 가능할 수 있습니다. 구입 가능 여부는 관련 제품을 참조하십시오.
  TdT HDR 플라스미드 (h) 및 TdT HDR 플라스미드 (h2)에 의해 암호화되는
  HDR 기증자 컨스트럭트는 푸로마이신 내성 카세트와 RFP 리포터를 포함하며, 이는 CRISPR/Cas9 KO 설계에 해당하는 정의된 DNTT 표적 부위에서의 상동성 유도 복구를 지원하기 위해 DNTT 상동성 암으로 둘러싸여 있습니다. HDR 기증자의 재고 여부는 달라질 수 있습니다. 재고 여부는 관련 제품을 참조하십시오.

연구용으로만 사용하세요. 진단 또는 치료용이 아닙니다.