TBX5 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-423282-LAC

Il gene murino **Tbx5** codifica **TBX5**, un fattore di trascrizione della famiglia T-box che si lega a motivi di DNA specifici di sequenza per coordinare programmi di regolazione genica durante lo sviluppo embrionale e la definizione dei pattern tissutali. TBX5 è un determinante centrale della morfogenesi cardiaca e della specificazione dell’arto anteriore, integrando reti trascrizionali che controllano la differenziazione dei cardiomiociti, la formazione delle camere cardiache e la maturazione del sistema di conduzione. Agisce in sinergia con altri fattori di linea cellulare, come **NKX2-5** e le proteine **GATA**, per regolare enhancer che controllano geni strutturali ed elettrofisiologici. Un dosaggio o un’attività di TBX5 deregolati sono associati a malformazioni congenite del cuore e degli arti, rendendolo un nodo prezioso per studiare la regolazione genica dello sviluppo e le relazioni genotipo–fenotipo in modelli murini.

Le particelle di attivazione lentivirale TBX5 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Tbx5 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale TBX5 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Tbx5, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di TBX5. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Tbx5 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.