TBX18 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401564-ACT

TBX18はT-boxファミリーに属する転写因子をコードしており、系譜（ライン）指定や間葉系分化プログラムを制御することで、胚発生におけるパターニングおよび器官形成を指揮します。ヒトの発生では、TBX18は泌尿生殖器系および筋骨格系の形態形成と強く関連し、発生遺伝子ネットワークを転写制御することで心臓の刺激伝導系の形成にも寄与します。その活性は、WNT、BMP、FGFなどのシグナルに影響される経路を含め、組織境界の形成や細胞運命決定を形作るシグナル伝達過程と交差しています。TBX18の発現や機能の破綻は先天性の発生異常と関連づけられており、器官発生や疾患関連表現型の基盤となる転写回路を研究するうえで有用な結節点（ノード）となります。

TBX18 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TBX18の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TBX18 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TBX18 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTBX18転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TBX18の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTBX18遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTBX18依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTBX18発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTBX18経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。