TBL1YCRISPR激活质粒(h): sc-404389-ACT

TBL1Y 编码一种由 Y 染色体连锁的、类似转导蛋白 β 亚基（transducin beta-like）的蛋白质，是 NCoR/SMRT 转录共抑制复合体机器的重要组成部分，有助于将染色质相关的抑制与激活程序与信号依赖性的基因调控相耦联。通过与组蛋白修饰酶和转录因子相互作用，TBL1Y 相关复合体可影响 RNA 聚合酶 II 转录、核受体信号传导以及发育相关基因表达的动态变化。尽管相较其旁系同源基因 TBL1XR1 的研究较少，TBL1 家族蛋白被广泛认为参与调控细胞命运决定、炎症信号以及肿瘤相关的转录重编程等通路。对 TBL1Y 的研究有助于探索性别连锁的调控网络、转录共调节因子生物学，以及在疾病相关情境下染色质依赖性基因表达失调的机制。

TBL1Y CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性TBL1Y的表达。

TBL1Y CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的TBL1Y基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于TBL1Y转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性TBL1Y表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的TBL1Y位点，并能够研究内源性位点上依赖于TBL1Y的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在TBL1Y表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟TBL1Y通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。