TBL1Y Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404389-ACT

TBL1Y codifica una proteina simil-transducina beta legata al cromosoma Y, che funziona come componente del macchinario corepressore trascrizionale NCoR/SMRT, contribuendo ad accoppiare i programmi di repressione e attivazione associati alla cromatina con la regolazione genica dipendente dai segnali. Attraverso interazioni con enzimi che modificano gli istoni e con fattori di trascrizione, i complessi correlati a TBL1Y influenzano la trascrizione mediata dall’RNA polimerasi II, la segnalazione dei recettori nucleari e la dinamica dell’espressione genica durante lo sviluppo. Sebbene sia meno caratterizzato rispetto al paralogo TBL1XR1, le proteine della famiglia TBL1 sono ampiamente implicate in vie che governano le decisioni di destino cellulare, la segnalazione infiammatoria e la riprogrammazione oncogenica della trascrizione. Lo studio di TBL1Y supporta le ricerche sulle reti regolatorie legate al sesso, sulla biologia dei coregolatori trascrizionali e sulla disregolazione dell’espressione genica dipendente dalla cromatina in contesti rilevanti per la malattia.

TBL1Y Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TBL1Y senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TBL1Y Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TBL1Y nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TBL1Y, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TBL1Y. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TBL1Y nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TBL1Y nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TBL1Y nelle cellule tumorali con espressione di TBL1Y silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.