TARSL1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-410152-ACT

ヒトTARS2は、ミトコンドリアtRNA(Thr)にスレオニンを付加してアミノアシル化（チャージ）するために必要なミトコンドリア型スレオニルtRNA合成酵素をコードしており、ミトコンドリア翻訳の忠実性の維持に寄与する。酸化的リン酸化（OXPHOS）サブユニットの合成を支えることで、TARSL1/TARS2の活性はミトコンドリアのプロテオスタシス、呼吸鎖機能、ならびに細胞のエネルギー代謝と密接に結び付いている。この軸の破綻は、増殖や生存に影響する統合ストレスシグナル伝達やミトコンドリア―核間コミュニケーション経路を再編成し得る。ミトコンドリア翻訳およびOXPHOSの異常は、神経発達・神経筋表現型からがん代謝に至るまで繰り返し認められる特徴であり、TARS2はミトコンドリア機能障害の機構研究に有用な結節点となる。

TARSL1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TARS2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TARSL1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TARS2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTARS2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TARSL1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTARS2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTARSL1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTARS2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTARSL1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。