Talin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401342-ACT

O TLN1 humano codifica a talina, um adaptador do citoesqueleto que liga as caudas citoplasmáticas das β-integrinas à F-actina, promovendo a ativação de integrinas, a montagem de adesões focais e a mecanotransdução. Em coordenação com a quinase de adesão focal (FAK), a sinalização da família Src, a remodelação de actina dependente de GTPases Rho e as vias PI3K–AKT, a talina ajuda a regular a adesão, o espalhamento, a migração e a sobrevivência celular em resposta a sinais da matriz extracelular. A alteração da expressão de TLN1 ou da dinâmica de adesão dependente de talina tem sido associada a invasão desregulada e comportamento metastático, bem como a defeitos na hemostasia e no tráfego de células imunes que dependem da sinalização por integrinas. Essas propriedades fazem do TLN1 um alvo amplamente utilizado para estudar redes de sinalização dependentes de adesão e interações célula–matriz sensíveis à força.

Talin-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TLN1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Talin-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TLN1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TLN1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Talin-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TLN1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Talin-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Talin-1 em células tumorais com expressão de TLN1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.