Tak1L Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-406747-ACT

MAP3K7CL codifica Tak1L, uma proteína semelhante a quinase quinase quinase de MAP quinase, relacionada ao módulo de sinalização TAK1/MAP3K7, que acopla sinais a montante a cascatas de quinases a jusante. Proteínas desse eixo são comumente associadas à regulação das vias de NF-κB e MAPK, moldando a sinalização inflamatória, as respostas ao estresse e o controle dependente do contexto de programas transcricionais. Embora MAP3K7CL permaneça menos bem caracterizado do que a TAK1 canônica, sua similaridade com membros da família MAP3K o torna relevante para investigar a arquitetura de redes de quinases, a redundância de vias e a sinalização compensatória. A desregulação da sinalização associada à TAK1 está implicada em fenótipos imunes e inflamatórios e em estados de sinalização ligados ao câncer, sustentando estudos exploratórios da função de MAP3K7CL em modelos celulares relevantes para doenças.

Tak1L O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MAP3K7CL sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Tak1L O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MAP3K7CL em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MAP3K7CL, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Tak1L. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MAP3K7CL nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Tak1L no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Tak1L em células tumorais com expressão de MAP3K7CL silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.