Tak1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-424044-ACT

O gene murino Map3k7 codifica a TAK1, uma MAP3K serina/treonina que integra a sinalização a jusante de receptores de TNF, IL-1, ligantes de TLR e membros da família TGF-β para coordenar respostas inflamatórias e ao estresse. A TAK1 fosforila MAP2Ks para ativar as cascatas de JNK e p38 MAPK e ativa o complexo IKK para induzir a transcrição dependente de NF-κB, moldando assim a produção de citocinas, a apoptose e as decisões de sobrevivência celular. Por meio dessas vias, a TAK1 influencia a ativação da imunidade inata, a homeostase tecidual e as respostas celulares ao estresse genotóxico e oxidativo. A desregulação da sinalização de TAK1 tem sido implicada em patologias inflamatórias, processos relacionados à fibrose e redes de sinalização oncogênicas, tornando o Map3k7 um nó amplamente utilizado em estudos mecanísticos de interconexão entre vias de sinalização.

Tak1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Map3k7 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Tak1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Map3k7 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Map3k7, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Tak1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Map3k7 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Tak1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Tak1 em células tumorais com expressão de Map3k7 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.