Tafazzin Plasmide Double Nickase (h): sc-403588-NIC

TAZ codifica la tafazzina, un’aciltransferasi associata alla membrana interna mitocondriale che rimodella la cardiolipina per mantenere la corretta composizione delle catene aciliche necessaria all’organizzazione della catena respiratoria e a una fosforilazione ossidativa efficiente. Attraverso la maturazione della cardiolipina, la tafazzina sostiene l’architettura delle creste mitocondriali, la dinamica delle membrane e la stabilità dei supercomplessi proteici coinvolti nel trasporto di elettroni. L’alterazione di TAZ compromette l’omeostasi dei fosfolipidi, aumenta la monolisocardiolipina e può spostare la bioenergetica cellulare verso risposte allo stress legate a una funzione mitocondriale compromessa. La disfunzione di TAZ è fortemente associata alla sindrome di Barth ed è spesso studiata nel contesto di cardiomiopatia, miopatia scheletrica, neutropenia e difetti più ampi del rimodellamento lipidico mitocondriale.

Tafazzin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TAZ nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TAZ. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TAZ. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TAZ interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.