SYT CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401575-ACT

SS18（SYTとも呼ばれる）は、SWI/SNF（BAF）クロマチンリモデリング複合体と会合してエンハンサーおよびプロモーターのアクセス性に影響を与える、核内転写コレギュレーターをコードしています。これらの相互作用を通じて、SS18は細胞のアイデンティティ、分化、増殖に関連するRNAポリメラーゼII依存的な転写プログラムの制御に寄与します。SS18は、SS18を含む再発性の再配列がクロマチン制御を組み替え、系譜に不適切な遺伝子発現を異常に活性化し得ることから、疾患との関連が高く、腫瘍性の転写依存性を研究するうえで重要な結節点となります。その機能は一般に、クロマチンリモデリング、エピジェネティック状態の制御、転写因子ネットワークのダイナミクスという文脈で検討されます。

SYT CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SS18の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SYT CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SS18 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSS18転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SYTの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSS18遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSYT依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSS18発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSYT経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。