SYND3/SDC3/Syndecan-3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402392-ACT

O SDC3 humano codifica a sindecana-3 (SYND3), um proteoglicano transmembranar de heparan sulfato que atua como correceptor de ligantes da matriz extracelular e de fatores de crescimento, modulando a adesão celular, a migração e a sinalização por receptores. Por meio de suas cadeias de glicosaminoglicanos e do motivo citoplasmático de ligação a PDZ, a SYND3 influencia vias associadas à organização do citoesqueleto e à sinalização MAPK/PI3K, moldando o desenvolvimento neuronal, a orientação axonal e a plasticidade sináptica. A SYND3 também participa da regulação inflamatória e metabólica ao ajustar a disponibilidade de quimiocinas e fatores de crescimento na superfície celular. A expressão desregulada de SDC3 ou alterações na sinalização de proteoglicanos têm sido associadas a processos relevantes para fenótipos do neurodesenvolvimento, o equilíbrio energético relacionado à obesidade e interações entre células tumorais e o microambiente.

SYND3/SDC3/Syndecan-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SDC3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SYND3/SDC3/Syndecan-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SDC3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SDC3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SYND3/SDC3/Syndecan-3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SDC3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SYND3/SDC3/Syndecan-3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SYND3/SDC3/Syndecan-3 em células tumorais com expressão de SDC3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.