SVEP1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-413315-ACT

SVEP1 (contendo domínios sushi, fator de von Willebrand tipo A, EGF e pentraxina 1) codifica uma grande glicoproteína associada à matriz extracelular que dá suporte às interações célula–célula e célula–matriz. Ela participa de processos de adesão e morfogênese ao modular a sinalização dependente de integrinas, a organização da matriz extracelular e programas de remodelamento tecidual que influenciam a comunicação entre endotélio e estroma. O SVEP1 tem sido implicado em contextos de desenvolvimento e biologia vascular, e alterações em sua expressão foram associadas ao remodelamento inflamatório e à suscetibilidade a doenças cardiometabólicas. Essas propriedades tornam o SVEP1 um alvo útil para estudar redes de sinalização da matriz extracelular, migração celular e a regulação da expressão gênica dependente do microambiente.

SVEP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SVEP1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SVEP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SVEP1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SVEP1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SVEP1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SVEP1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SVEP1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SVEP1 em células tumorais com expressão de SVEP1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.