SUR-2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423218

Visão geral

Abcc9 codifica o recetor de sulfonilureia 2 (SUR-2), uma subunidade reguladora dos canais de potássio sensíveis ao ATP (KATP) que liga o estado metabólico celular à excitabilidade da membrana ao controlar a abertura/fecho (gating) dos canais Kir6.x. No rato, os canais KATP que contêm SUR-2 são proeminentes no músculo liso cardíaco e vascular, onde modulam a duração do potencial de ação, o manuseamento de cálcio e o tónus vascular em resposta a alterações nas vias de sinalização de ATP/ADP e fosfolípidos. Através destas funções, a ABCC9 integra sinais bioenergéticos com vias adaptativas ao stress, como o pré-condicionamento isquémico, programas de contratilidade do músculo liso e a função mitocondrial. A desregulação da atividade de ABCC9/canais KATP tem sido associada a fenótipos cardiovasculares e metabólicos, e variantes humanas de ABCC9 estão associadas a síndromes de canalopatias que afetam o coração e a vasculatura, tornando o Abcc9 um alvo relevante para modelação mecanística de doenças.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO SUR-2 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Abcc9 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Abcc9, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Abcc9 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína SUR-2.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Abcc9 para a investigação da sinalização de SUR-2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Abcc9 críticos para a função SUR-2
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Abcc9 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo SUR-2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo SUR-2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Abcc9. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo SUR-2 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR SUR-2 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Abcc9 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Abcc9 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.