Superoxide Dismutase 1/SOD1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400186-ACT

SOD1 codifica la superossido dismutasi citosolica Cu/Zn che catalizza la dismutazione degli anioni superossido in perossido di idrogeno e ossigeno, costituendo una barriera enzimatica primaria contro le specie reattive dell’ossigeno. Modellando l’omeostasi redox, SOD1 influenza le risposte allo stress ossidativo, la funzione mitocondriale e le vie di segnalazione a valle che regolano infiammazione, proteostasi e apoptosi. Un’alterata attività di SOD1 compromette la capacità antiossidante cellulare e può contribuire al misfolding proteico e alla vulnerabilità dei motoneuroni, con forte rilevanza per la neurodegenerazione e per fenotipi più ampi associati allo stress. La SOD1 umana è quindi ampiamente studiata in modelli di squilibrio redox, biologia dell’aggregazione e disfunzione cellulare legata al danno ossidativo.

Superoxide Dismutase 1/SOD1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SOD1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Superoxide Dismutase 1/SOD1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SOD1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SOD1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Superoxide Dismutase 1/SOD1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SOD1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Superoxide Dismutase 1/SOD1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Superoxide Dismutase 1/SOD1 nelle cellule tumorali con espressione di SOD1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.