Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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SUMF1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406543
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- SUMF1 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico SUMF1, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: SUMF1 Anticuerpo (B-9): sc-376035
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
SUMF1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-406543 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
SUMF1 codifica la enzima generadora de formilglicina (FGE), una oxidasa luminal del retículo endoplásmico necesaria para la activación posraduccional de todas las sulfatasas mediante la conversión de una cisteína conservada en Cα-formilglicina. Esta modificación es esencial para la hidrólisis de ésteres de sulfato lisosomales y extracelulares, lo que vincula a SUMF1 con el recambio de glucosaminoglucanos, el metabolismo de esfingolípidos y vías catabólicas más amplias dependientes del lisosoma. La alteración de SUMF1 reduce la actividad global de las sulfatasas y puede dar lugar a fenotipos de almacenamiento lisosomal caracterizados por una depuración deficiente de sustratos y una homeostasis celular alterada. Por ello, SUMF1 se estudia ampliamente en el contexto de la biología de las sulfatasas, la función lisosomal y los mecanismos que subyacen a la patogénesis asociada a la deficiencia múltiple de sulfatasas.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO SUMF1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen SUMF1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del SUMF1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de SUMF1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína SUMF1.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en SUMF1 para la investigación de la señalización de SUMF1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de SUMF1 críticos para la función de SUMF1
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de SUMF1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido SUMF1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido SUMF1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus SUMF1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR SUMF1 (h) y el plásmido HDR SUMF1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología SUMF1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana SUMF1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.