Su[fu] 더블 틈내기효소 플라스미드 (m): sc-423973-NIC

Sufu(Suppressor of Fused)는 Hedgehog 신호전달을 억제하는 핵심 세포내 억제인자를 암호화하며, GLI 전사인자를 제어하고 배아 발생 시 패터닝과 조직 항상성 과정에서 경로 활성화의 역치(threshold)를 설정하는 데 기여한다. 마우스 세포에서 Su[fu]는 PTCH1/SMO 하위에서 GLI의 가공(processing), 핵 내 이동(nuclear localization), 그리고 전사 출력(transcriptional output)을 조절함으로써 1차 섬모(primary cilium) 의존적 신호전달 및 발달 관련 유전자 프로그램과 연결된다. SUFU 기능의 장애는 비정상적인 Hedgehog 경로 활성과 연관되어 선천성 기형과 종양형성 과정에 관여하는 것으로 알려져 있어, Sufu는 신호전달 조절을 연구하는 데 널리 사용되는 핵심 노드이다. 또한 Sufu 중심의 모델은 세포주기 조절, 분화, 줄기/전구세포 유지와의 경로 간 상호작용(cross-talk)을 탐구하는 데에도 활용된다.

Su[fu] 더블 니카제 플라스미드(m)는 mouse 세포주 내 Sufu 유전자좌의 고특이성 편집을 위해 설계된 쌍을 이루는 플라스미드로 구성됩니다. 각 플라스미드는 Cas9 D10A 니카아제와 Sufu 내의 반대 DNA 가닥을 표적으로 하는 고유한 sgRNA를 발현합니다. 반대 DNA 가닥의 인접 부위로 유도될 때, 두 니카아제는 서로 어긋난 단일 가닥 절단 부위를 생성하며, 이는 함께 엇갈린 이중 가닥 절단을 유발하여 두 가이드의 조화된 표적 활성을 필요로 합니다. 이렇게 생성된 DNA 절단은 내인성 세포 복구 경로, 특히 비동형 말단 결합(NHEJ)을 통해 해결되며, 이는 Sufu의 기능을 방해하는 삽입 또는 결실을 초래한다. 표적 부위에서 이중 sgRNA 결합을 요구함으로써, 이중 니킹 접근법은 편집 특이성을 향상시키고 표적 정밀도에 대한 추가적인 제어가 필요한 응용을 위한 보완적인 CRISPR 전략을 제공한다.

편집된 세포를 효율적으로 식별할 수 있도록, 한 플라스미드는 형광 시각화를 위한 GFP를 발현하며, 다른 플라스미드는 항생제 선별을 위한 푸로마이신 내성 유전자를 포함하고 있습니다. 이러한 기능들은 공동 형질 도입된 세포 집단의 효율적인 농축을 지원하며, Sufu 기능이 손상된 클론의 검증을 단순화합니다.

연구용으로만 사용하세요. 진단 또는 치료용이 아닙니다.