STK33 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404127-ACT

STK33（セリン／スレオニンキナーゼ33）は、細胞の生存、増殖、ならびに細胞骨格の組織化に影響する細胞内シグナル伝達ネットワークの調節に関与するとされるヒトのプロテインキナーゼです。推定セリン／スレオニンキナーゼとして、STK33はがん性シグナル伝達への依存性やストレス応答経路の文脈で研究されており、キナーゼ活性の変化が下流のリン酸化プログラムを再編成し得ることが示唆されています。モデル系では、STK33の発現や機能の破綻が、増殖制御やアポトーシス感受性の変化など、がんに関連する表現型と関連づけられています。これらの特性により、STK33は、生物医学研究においてキナーゼ駆動の経路再構築や、状況依存的な遺伝子機能を解析するための有用な標的となります。

STK33 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性STK33の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

STK33 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における STK33 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSTK33転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性STK33の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSTK33遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSTK33依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSTK33発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSTK33経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。