Stat3 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400027-LAC

STAT3 umano codifica Stat3, un fattore di trascrizione citoplasmatico latente attivato dalla segnalazione di citochine e fattori di crescita. In seguito alla fosforilazione a valle delle chinasi JAK e delle tirosin-chinasi recettoriali, Stat3 dimerizza e trasloca nel nucleo per regolare programmi che controllano proliferazione, sopravvivenza, infiammazione e differenziamento, inclusi geni della fase acuta e geni immunomodulatori. STAT3 integra segnali da vie quali IL-6/GP130–JAK–STAT ed EGFR, nonché dal crosstalk con NF-κB e PI3K/AKT. Un’attività di STAT3 deregolata è frequentemente associata ad alterazioni della segnalazione immunitaria, stati infiammatori cronici e reti trascrizionali oncogeniche, rendendolo un nodo comune per studi meccanicistici sulla trasduzione del segnale e sulla regolazione genica.

Le particelle di attivazione lentivirale Stat3 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di STAT3 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Stat3 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione STAT3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Stat3. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo STAT3 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.