StAR CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400961-ACT

ヒトのSTAR遺伝子は、ステロイド生成急性調節タンパク質（StAR）をコードしている。StARはミトコンドリアに関連する因子であり、ステロイドホルモン生合成における律速段階として、コレステロールをミトコンドリア外膜から内膜へ送達する過程を仲介する。この輸送ステップはCYP11A1によるプレグネノロン産生に必須で、副腎および性腺細胞におけるcAMP/PKA駆動性のステロイド産生シグナル伝達と統合されている。StARの機能破綻や発現調節異常は、ミトコンドリアでのコレステロール取り扱いと下流のステロイド生成を変化させ、STARを内分泌・生殖に関わる表現型と結び付けるとともに、ミトコンドリア脂質トラフィッキングおよびステロイド生成代謝を研究するための機序的な足掛かりを提供する。そのためSTARは、副腎・性腺機能、ストレスシグナル、ならびにホルモン産生の代謝制御に関するモデルで頻繁に検討されている。

StAR CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性STARの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

StAR CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における STAR 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSTAR転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性StARの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSTAR遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるStAR依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSTAR発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるStAR経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。