St3Gal-I Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422935

Panoramica

Il gene murino **St3gal1** codifica la sialiltransferasi residente nel Golgi **St3Gal-I**, che catalizza l’aggiunta di acido sialico con legame **α2,3** alle strutture **Galβ1-3GalNAc**, generando O-glicani core 1 sialilati. Modulando lo stato di sialilazione delle O-glicoproteine di tipo mucinico, St3Gal-I influenza la stabilità delle proteine mediata dai glicani, l’interazione con i recettori e le interazioni cellula–cellula o cellula–matrice. Questa attività contribuisce a processi più ampi dipendenti dalla glicosilazione, quali il riconoscimento immunitario, il traffico leucocitario e la modulazione della segnalazione alla superficie cellulare. Alterazioni dell’attività di **ST3GAL1** e dei pattern di sialilazione degli O-glicani core 1 sono state associate all’infiammazione e al rimodellamento dei glicani correlato ai tumori, rendendo **St3gal1** un bersaglio utile per studi meccanicistici dei cambiamenti di glicosilazione rilevanti per la malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO St3Gal-I (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene St3gal1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del St3gal1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto St3gal1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina St3Gal-I.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di St3gal1 per lo studio della segnalazione di St3Gal-I, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni St3gal1 critici per la funzione di St3Gal-I
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di St3gal1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal St3Gal-I CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal St3Gal-I CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus St3gal1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal St3Gal-I Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR St3Gal-I (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia St3gal1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio St3gal1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.