ST CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400733-ACT

SLC6A4は、ナトリウムおよび塩化物依存性のセロトニントランスポーター（ST、SERTとも呼ばれる）をコードしている。これは形質膜上の共輸送体であり、細胞外空間から5-ヒドロキシトリプタミン（セロトニン）を再取り込みすることでセロトニン作動性シグナル伝達を終結させる。セロトニンの利用可能性を調節することで、STは神経伝達、シナプス可塑性、ならびにcAMP/PKAおよびMAPK依存的な転写応答に関連する下流のシグナル伝達ネットワークを形成する。神経細胞に加えて、SLC6A4の活性は血小板や消化管組織における末梢のセロトニン作動性プロセスにも影響し、これらは神経免疫系やストレス応答経路と交差している。SLC6A4の発現や機能の変化は、神経精神疾患や行動表現型に対する感受性と関連しており、セロトニン回路の制御機構を解明する研究において重要な標的となる。

ST CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SLC6A4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ST CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SLC6A4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSLC6A4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性STの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSLC6A4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるST依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSLC6A4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるST経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。